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    小鼠淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗體(LCM Ab)ELISA試劑盒說明書
    更新時間:2019-07-02 點擊量:1483

    小鼠淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗體(LCM Ab)酶聯免疫分析(ELISA

    試劑盒使用說明書

    本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗體(LCM Ab)水平

    實驗原理

       本試劑盒用雙抗夾心酶聯免疫(ELISA)測定標本小鼠淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗體(LCM Ab)水平。用純化的小鼠淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗原包被微孔板,制成固相抗原可與樣品中淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗體(LCM Ab)相結合經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中小鼠淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗體(LCM Ab)的存在與否。

     

    試劑盒組成

    試劑盒組成

    48孔配置

    96孔配置

    保存

    說明書

    1份

    1份

     

    封板膜

    2片(48)

    2片(96)

     

    密封袋

    1個

    1個

     

    酶標包被板

    1×48

    1×96

    2-8℃保存

    陰性對照

    0.5ml×1瓶

    0.5ml×1瓶

    2-8℃保存

    陽性對照

    0.5ml×1瓶

    0.5ml×1瓶

    2-8℃保存

    酶標試劑

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    樣品稀釋液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    顯色劑A液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    顯色劑B液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    終止液

    3ml×1瓶

    6ml×1瓶

    2-8℃保存

    濃縮洗滌液

    (20ml×20倍)×1瓶

    (20ml×30倍)×1瓶

    2-8℃保存

     

    樣本處理及要求

    1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

    2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

    3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

    5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融.

    7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

     

    操作步驟

    • 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
    • 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
    • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
    • 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
    • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    • 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外
    • 溫育:操作同3。
    • 洗滌:操作同5。
    • 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘
    • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)
    • 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

     

    結果判定:

      試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.10

      臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

      陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為小鼠淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗體(LCM Ab)陰性

      陽性判定:樣品OD值 臨界值(CUT OFF)者為小鼠淋巴細胞脈絡叢腦膜炎抗體(LCM Ab)陽性

    注意事項

    1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

    2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    • 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    5.底物請避光保存。

    6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

    7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

     

    保存條件及有效期

    1.試劑盒保存:;2-8

    2.有效期:6個月

    ELISA試劑盒免費代檢測和實驗代做報價

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