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    瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒操作說明書
    更新時間:2021-03-10 點擊量:2767

    瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒

    Midi Purification Kit

    保存條件:本試劑盒在室溫儲存 18 個月不影響使用效果。

    產品介紹:

    在高離序鹽存在的情況下,DNA-* 片斷選擇性的吸附于離心柱內的硅基質膜上,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質去除,后用低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA 從硅基質膜上洗脫。

    產品特點:

    1. 離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。

    2. 使用了溶膠液,不含傳統溶膠液的碘化和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應。

    3. 溶膠液調制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監測pH值變化從而達到li結合效果,大大提高回收效率。

    4. 注意事項:

    1. 所有的溶液應該是澄清的,如果環境溫度低時溶液可能形成沉淀,此時不應該直接使用,可在37℃水浴加熱幾分鐘,即可恢復澄清。使用前應該恢復到室溫。

    2. 儲存于低溫(4℃或者-20℃)會造成溶液沉淀,影響使用效果,因此運輸和儲存均在室溫下(15-25℃)進行。

    3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH 值變化,各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

    4. 溶膠液中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。

    5. 回收純化的DNA-*片段一般在100bp40kb之間,過長、過短片段的回收效率降低。

    6. 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脫體積、DNA-*片斷大小有關。一般1-20μg100bp-5kbDNA-*片段,回收率可高達85%-95%

    7. 切膠回收時,紫外燈觀察對DNA-*片段有損壞作用,應該盡可能使用能量低的長波紫外線,并且盡可能的縮短紫外線下處理的時間。

    8. pH≤7.5時,吸附膜吸附DNA的效率-*。如果切下來的凝膠中含有電泳緩沖液太多,造成溶膠后溶膠液pH偏高,會導致回收率降低。溶膠后,如果溶膠液依舊保持黃色,說明pH正常;如果變成橘紅色或者淡紫色,說明pH偏高,可在膠充分溶解后加5-10μl3M醋酸鈉(pH5.2)將pH值調到5-7(黃色

    9. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫,但應該確保pH大于7.5pH過低影響洗脫效率。用水洗脫,DNA-*片段應該保存在-20℃。DNA-*片段如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫10mM Tris-HCl1mM EDTApH 8.0,但是EDTA可能影響下游酶切反應,使用時可以適當稀釋。

    自備試劑:無水乙醇操作步驟:

    提示:次使用前請先在漂洗液WB中加入量無水乙醇,加入后請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!

    1. 在長波紫外燈下,用干凈刀片將所需回收的DNA 條帶切下,盡量切除不含DNA 的凝膠,得到凝膠體積越小越好。

    2. 將切下的含有DNA條帶凝膠放入1.5ml 離心管,稱重。

    3. 3倍體積溶膠液DD凝膠重為100mg,則加入300μl 溶膠液)

    如果凝膠濃度大于2%,應加入6 倍體積溶膠液。

    4.56℃水浴放置10min(或直至膠*溶解。每2-3min 渦旋震蕩一次加速溶解。

    5. 可選,100mg 初的凝膠重量加入150μl 的異丙醇,震蕩混勻。

    6. 將上一步所得溶液加入吸附柱EC 中(吸附柱放入收集管中,室溫放置1min12,000rpm 離心30-60sec,倒掉收集管中的廢液。

    7. 加入500μl 漂洗液WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!12,000rpm 離心30sec,棄掉廢液。

    8. 重復操作步驟 7

    9. 將吸附柱EC 放回空收集管中,12,000rpm 離心2min,盡量去除漂洗液,以免漂洗液中殘留的乙醇抑制下游反應。

    10 取出吸附柱EC,放入一個干凈的離心管中,室溫放置數分鐘。

    11.在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液EB(洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好,室溫放置 2min12,000rpm 離心1min。如果需要較多量DNA,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,離心1min(注意:洗脫體積不應小于30μl,體積過少影響回收效率)

     

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