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    豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯免疫法)
    更新時間:2020-07-03 點擊量:2234

    豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯免疫法)

    說明書

    【產品名稱】

    通用名稱:豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯免疫法)

    英文名稱:Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab

    規格】

    96×2測試/盒

    【預期用途】

     本試劑盒用于定性測定豬血清中日本乙型腦炎病毒(又稱流行性乙型腦炎)IgG抗體。用于評估豬場豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況,感染豬的血清學診斷以及豬乙型腦炎病毒的流行病學調查。

    【檢驗原理】

     本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗(ELISA)原理,由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的JEV-IgG結合,再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標抗豬IgG抗體”復合物,加入顯色劑,通過酶催化反應顯色。顯深淺與JEV-IgG的量成正比,當顯色超過設定的臨界值時結果判為陽性,表明免疫有效或有自然感染。

    【要組成成份】`

    1

    JEV抗原包被板

    96T×2

    2

    酶標記物

    22ml

    色帽

    3

    樣本稀釋液

    50ml

    透明

    4

    JEV-IgG陰性對照血清

    1.5ml

    綠色帽

    5

    JEV-IgG陽性對照血清

    1.5ml

    紅色帽

    6

    顯色劑

    12ml×2

    色帽

    7

    終止液

    12ml

    色帽

    8

    20X濃縮洗滌液

    50ml

    白色帽

    9

    蓋板膜

    2張

     

    10

    說明書

    1份

     

    自備器材

    1.酶標儀( 450nm  630nm濾光片

    2.微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道      30-300ul)

    3.水浴箱或恒溫箱

    4.微量振蕩器

    5.一次性槍頭(10ul、200ul)

    6.去離子水

    【樣本要求】

    1.本試劑檢測的樣本為豬血清,樣本應無菌采集,2℃~8℃貯存不超過一周,長期應在-20℃以下保存,避免反復凍融。

    2.避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的樣本。

    【實驗準備】

    1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前,先取出置室溫30min。酶標板應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開。

    2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋(例:將5ul樣本加至195ul樣本稀釋液中)。

    3.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(例:將50ml洗滌液加入950ml去離子水中)。若20倍濃縮洗滌液出現結晶,屬正常現象,放置37℃至溶解后即可。

    【操作步驟

    1.加樣:根據樣本數量,取所需板條。設陰、陽性對照各2孔,分別加入不稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應孔中。其余為樣本孔,每孔加入稀釋好的樣本100μl。

    2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。

    3.洗板:甩去孔內液體,用洗滌液注滿反應板孔,洗滌3次,每次停留10秒,后一次洗后拍干。

    4.加酶:每孔加酶標記物100μl

    5.溫育:加好酶標記物后,蓋好蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。

    6.洗板:同步驟3。

    7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應10分鐘。

    8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻。終止后即讀數。

    9.讀數:以450nm/ 630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD值)。

    【結果判定】

    在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6,陰性對照孔的平均OD值必須<0.1。

    樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定,S/P值計算時按以下方式處理:

      S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD值(0.05以下的數值按0.05計算),PCx(—)表示陽性對照孔平均OD值;

    當樣本的S/P≥0.25時判為陽性;樣品S/P值<0.25時判為陰性。

    【注意事項】

    1.本試劑盒僅用供研究使用。

    2.使用試劑盒之前,一定要仔細閱讀說明書。

    3.實驗廢棄物應經121高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

    4.未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。不同批號的試劑組份不可混用。

    5.應用微量移液器加入本及試劑,并經常校對其準確性。

    6.加洗滌液時應做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

    7.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。

    【儲存條件及有效期】

    于2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有效期12個月。

    【生產日期及批號】

    詳見包裝袋和外包裝盒。

     

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