豬乙型腦炎病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬乙型腦炎病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab

【規(guī)格】

96×2測(cè)試/盒

【預(yù)期用途】

 本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中日本乙型腦炎病毒（又稱流行性乙型腦炎）IgG抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷以及豬乙型腦炎病毒的流行病學(xué)調(diào)查。

【檢驗(yàn)原理】

 本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的JEV-IgG結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與JEV-IgG的量成正比，當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性，表明免疫有效或有自然感染。

【要組成成份】`

【自備器材】

1．酶標(biāo)儀（ 450nm  630nm濾光片）

2．微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道      30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．一次性槍頭（10ul、200ul）

6．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存不超過(guò)一周，長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融。

2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前，先取出置室溫30min。酶標(biāo)板應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（例：將5ul樣本加至195ul樣本稀釋液中）。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（例：將50ml洗滌液加入950ml去離子水中）。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正常現(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。

【操作步驟】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，分別加入不稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加入稀釋好的樣本100μl。

2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，洗滌3次，每次停留10秒，后一次洗后拍干。

4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl。

5．溫育：加好酶標(biāo)記物后，蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻。終止后即讀數(shù)。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均OD值≥0.6，陰性對(duì)照孔的平均OD值必須＜0.1。

樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定，S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對(duì)照孔平均OD值（0.05以下的數(shù)值按0.05計(jì)算），PCx(—)表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD值；

當(dāng)樣本的S/P≥0.25時(shí)判為陽(yáng)性；樣品S/P值＜0.25時(shí)判為陰性。

【注意事項(xiàng)】

1．本試劑盒僅用供研究使用。

2．使用試劑盒之前，一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

3．實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

4．未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。不同批號(hào)的試劑組份不可混用。

5．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

6．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

7．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個(gè)月。

【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

詳見(jiàn)包裝袋和外包裝盒。

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