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    豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
    更新時(shí)間:2020-07-03 點(diǎn)擊量:2235

    豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

    說(shuō)明書(shū)

    【產(chǎn)品名稱】

    通用名稱:豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

    英文名稱:Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab

    規(guī)格】

    96×2測(cè)試/盒

    【預(yù)期用途】

     本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中日本乙型腦炎病毒(又稱流行性乙型腦炎)IgG抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況,感染豬的血清學(xué)診斷以及豬乙型腦炎病毒的流行病學(xué)調(diào)查。

    【檢驗(yàn)原理】

     本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的JEV-IgG結(jié)合,再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物,加入顯色劑,通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。顯深淺與JEV-IgG的量成正比,當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性,表明免疫有效或有自然感染。

    【要組成成份】`

    1

    JEV抗原包被板

    96T×2

    2

    酶標(biāo)記物

    22ml

    色帽

    3

    樣本稀釋液

    50ml

    透明

    4

    JEV-IgG陰性對(duì)照血清

    1.5ml

    綠色帽

    5

    JEV-IgG陽(yáng)性對(duì)照血清

    1.5ml

    紅色帽

    6

    顯色劑

    12ml×2

    色帽

    7

    終止液

    12ml

    藍(lán)色帽

    8

    20X濃縮洗滌液

    50ml

    白色帽

    9

    蓋板膜

    2張

     

    10

    說(shuō)明書(shū)

    1份

     

    自備器材

    1.酶標(biāo)儀( 450nm  630nm濾光片

    2.微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道      30-300ul)

    3.水浴箱或恒溫箱

    4.微量振蕩器

    5.一次性槍頭(10ul、200ul)

    6.去離子水

    【樣本要求】

    1.本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無(wú)菌采集,2℃~8℃貯存不超過(guò)一周,長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融。

    2.避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。

    【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

    1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫30min。酶標(biāo)板應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)。

    2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋(例:將5ul樣本加至195ul樣本稀釋液中)。

    3.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(例:將50ml洗滌液加入950ml去離子水中)。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正常現(xiàn)象,放置37℃至溶解后即可。

    【操作步驟

    1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條。設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔,分別加入不稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,每孔加入稀釋好的樣本100μl。

    2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。

    3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng)板孔,洗滌3次,每次停留10秒,后一次洗后拍干。

    4.加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl

    5.溫育:加好酶標(biāo)記物后,蓋好蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。

    6.洗板:同步驟3。

    7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。

    8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻。終止后即讀數(shù)。

    9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè),讀取各孔吸光度值(OD值)。

    【結(jié)果判定】

    在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均OD值≥0.6,陰性對(duì)照孔的平均OD值必須<0.1。

    樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定,S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:

      S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對(duì)照孔平均OD值(0.05以下的數(shù)值按0.05計(jì)算),PCx(—)表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD值;

    當(dāng)樣本的S/P≥0.25時(shí)判為陽(yáng)性;樣品S/P值<0.25時(shí)判為陰性。

    【注意事項(xiàng)】

    1.本試劑盒僅用供研究使用。

    2.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

    3.實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

    4.未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。不同批號(hào)的試劑組份不可混用。

    5.應(yīng)用微量移液器加入本及試劑,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

    6.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

    7.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

    【儲(chǔ)存條件及有效期】

    于2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有效期12個(gè)月。

    【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

    詳見(jiàn)包裝袋和外包裝盒。

     

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    滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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