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    Super-Bradford蛋白定量試劑盒說明書
    更新時間:2020-10-15 點擊量:1824

      

         Super-Bradford蛋白定量試劑盒說明書

     

    Super-BradfordProteinAssayKit                                                       

    Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書

     

    

    Cat.No. K0013                         

     

    保存:2-8℃

     

    組分說明

    

     

    Catalogno.                                 K0013

    KitSize                                800 次/微孔,100 次/試管

    BradfordProteinAssayReagent               200ml

    BSA 標準液(2mg/ml)                          2ml

     

    

     

    產品簡介

     

        Bradford 法是簡單和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合后,產生藍色化合物,反應迅速而穩定。反應化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系,因此可通過檢測 595nm 的光吸收值的大小來計算蛋白的含量。本產品將傳統的 Bradford 方法進行了改良,大限度的加大蛋白定量的線性范圍,變異性小于普通考馬斯亮藍染色法,靈敏度范圍為 100-1,500 μg/ml。使用本產品反應迅速,顏色產物 1 小時內保持穩定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統,不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。

     

    注意事項 

     

     1.  如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表 1),可采用 BCA 蛋白定量試劑盒(K0014)或其他蛋白定量產品。

     

     2.  BSA 標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋)。

     

     3.  本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量,所測蛋白分子量必須大于 3kD。

     

     4.  操作中請佩戴手套。

     

     5.  本產品僅限科研使用。

     

    

    操作步驟(以大腸桿菌表達系統為例)

     

     1.  稀釋 BSA 標準品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。

     

     

                                                    

    管號    稀釋液用量(μl)   BSA標準品用量(μl)    BSA標準品終濃度(μg/ml)

                                                     

     

    A                 0                 100                2,000

    B                50                 150                1,500

     

    C                200                200                1,000

     

    D                200         200(從C管中取)          500

    E                200         200(從D管中取)          250

     

    F                200         200(從E管中取)           125

    G                200                 0                 0(空白)

     

     

     2.  試管檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)

     

        1)按上表稀釋標準品,將 30 μl 稀釋好的 BSA 標準品分別加到作好標記的試管中。 

        2)取干凈的試管,分別加入 30 μl 待測蛋白樣品(原液或稀釋液),并作好標記,推薦每個測定做 2-3 個平行反應。

     

        3)向步驟 1)和步驟 2)的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,室溫放置 10 分鐘。

     

        4)用分光光度計測定 595nm 處的吸光值。

     

        5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

     

            注意:數據處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪制得曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

     

        6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。

     

     3.  微孔檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)

     

        1)將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5 μl 分別加到作好標記的 96 孔板微孔中。 

     

        2)每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,蓋上 96 孔板蓋,室溫放置 10 分鐘。

     

        4)用酶標儀測定 595nm 處的吸光值。

     

        5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

     

            注意:數據處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪制得曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

     

        6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。

     

      

     

    實驗代做服務:

    ELISA試劑盒免費代檢測

    CCK8檢測

    HE染色

    蛋白相互作用分析

    Western Blot

    免疫組化IHC染色

    熒光定量PCR

    動物模型服務

    流式細胞檢測

    免疫熒光染色

    激光共聚焦

    DNA甲基化實驗

    石蠟/冰凍切片

    透射電鏡服務

    掃描電鏡實驗

    蛋白雙向(2-D)

    動物實驗

    免疫共沉淀

    原位雜交(FIsh)

    蛋白質純化

    分子克隆和質粒載體構建服務

    組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

     

    蛋白雙向2D-WB

     

    藥理毒理動物實驗

     

    番紅O固綠染色

    明膠酶譜MMP

    酶活性檢測

    動物造模/模型實驗服務

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