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    微量BCA蛋白定量試劑盒說明書
    更新時間:2020-10-27 點擊量:2617

     

         微量BCA蛋白定量試劑盒說明書

    MicroBCAProteinAssayKit                                                            

    微量BCA蛋白定量試劑盒

     

    Cat.No.  K2011                       

    保存:BSA 標準品:2-8℃

          其 它 組

    分:室溫

    組分說明

     

    Catalogno.                  K2011

    Volume                      120ml

    MicroBCAReagentA (MA)               120ml

    MicroBCAReagentB (MB)               120ml

    MicroBCAReagentC (MC)                6ml

    BSA (2mg/ml)                             2ml

     

    產品簡介

     

          BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產品是基于 BCA(BicinchoninicAcid)法研制而成,實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與 Cu2+絡合生成絡合物,同時將 Cu 2+ 還原成 Cu +BCA 試劑可敏感特異地與Cu+結合,形成穩定的有顏色的復合物。在562nm 處有高的光吸收值,顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,可根據吸收值的大小來測定蛋白質的含量。本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設計,可精*&確測定濃度為 2.5-200 μg/ml 的蛋白溶液,試劑盒的靈敏性高,平行性好,不同種蛋白之間的測量差異極低。本試劑同多種非離子型去污劑有較好的相容性。

     

    注意事項 

     1.  BSA 標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋)。

    2.  操作中請佩戴手套。

    3.  本產品僅限科研使用。

     

    操作步驟

     1.  稀釋 BSA 標準品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。

     

     

    管號     稀釋液用量(μl)   標準品用量(μl)   終濃度(μg/ml)

     

    A               360                40                200

    B               400         100(從A管中取)            40

    C               250         250(從B管中取)            20

                                                          (從  管中取)

    D               250         250    C                   10

    E               250         250(從D管中取)              5

     

    F               250         250(從E管中取)              2.5

     

    G               250                0                0(空白)

     

     

     2.  配制 MicroBCA 測試工作液:根據標準品和樣品的數量配制測試液。

     

    試劑 MD 配制:4volumeMC+100volumeMB

     

    測試工作液 WR 配制: 1volumeMA+1volumeMD

     

    充分混勻后待用

     

     3.  試管及微板檢測(蛋白濃度檢測范圍:2.5-200 μg/ml)

     

        1)按上表準備好標準品及待測樣品。

     

        2)將蛋白樣品和測試工作液 WR 按照 1:1(體積比)比例加入,充分混勻。在 60 度孵育 60 分鐘。

     

        3)孵育完成后冷卻到室溫,在 562nm 處讀取吸光度值。

     

        4)標準品與待測樣品的吸光度值要扣除空白對照的吸光度值,然后進行濃度的計算。

     

        5)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。

     

     

    附表

                                 附表 1. 干擾物質表

                                                            

    化合物              耐受濃度               化合物              耐受濃度

     

                      緩沖液                             去垢劑和變性劑

     

    乙酸鹽                0.2M              Brij35             1%

    甘氨酸                 1M              CHAPS               1%

     

    HEPES              0.1M             鹽酸胍                 4M

     

    MES              50mM              NP-40               1%

     

    MOPS              50mM              辛葡糖                 1%

     

    Na+-檸檬酸             <1mM               SDS                1%

     

    PIPES             50mM            Triton X-100          1%

     

    磷酸鈉                0.1M                       糖類

     

    乙酸鈉             0.2M pH 5.5         葡萄糖               10mM

    TES              50mM               蔗糖                 1M

     

    Tris             0.1M                      螯合劑

     

    鹽類                         EDTA             10mM

                                                                           還原劑

    硫酸銨                干擾

     

    NaCl               1M            β-巰基乙醇               50μM

     

    尿素                 3M               DTT               1mM

     

    極性化合物                                  其他

     

    DMSO                5%               脂類                干擾

     

    甘油                10%            HCl/NaOH             0.1M

     

    實驗代做服務:

    ELISA試劑盒免費代檢測

    CCK8檢測

    HE染色

    蛋白相互作用分析

    Western Blot

    免疫組化IHC染色

    熒光定量PCR

    動物模型服務

    流式細胞檢測

    免疫熒光染色

    激光共聚焦

    DNA甲基化實驗

    石蠟/冰凍切片

    透射電鏡服務

    掃描電鏡實驗

    蛋白雙向(2-D)

    動物實驗

    免疫共沉淀

    原位雜交(FIsh)

    蛋白質純化

    分子克隆和質粒載體構建服務

    組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

     

    蛋白雙向2D-WB

     

    藥理毒理動物實驗

     

    番紅O固綠染色

    明膠酶譜MMP

    酶活性檢測

    動物造模/模型實驗服務

     

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