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    土壤脫氫酶試劑盒檢測(cè)說(shuō)明書
    更新時(shí)間:2021-05-09 點(diǎn)擊量:1690

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    土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)試劑盒說(shuō)明書

    微量法

    注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

    測(cè)定意義:

    土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對(duì)有機(jī)物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。

    測(cè)定原理:

    氫受體 2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在細(xì)胞呼吸過程中接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TFTF 呈現(xiàn)紅色,在波長(zhǎng) 485nm 處有最大吸收峰,采用分光光度法于 485nm 測(cè)定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。

    自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品:

    篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸餾水、丙酮(不允許快遞,請(qǐng)用戶自備

    試劑的組成和配制:

    試劑一:粉劑×1 瓶,使用前加 5mL 水溶解,4℃避光保存(盡量現(xiàn)配現(xiàn)用試劑二:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑三:丙酮,自備。

    樣品處理:

    1. 土壤樣品:準(zhǔn)確稱取過 40 目篩的新鮮土壤樣品約 0.1g以保證 TTC 與土壤顆粒充分接觸

    2. 污泥樣品:污泥用蒸餾水洗滌,10000g,25℃,離心 10min,棄上清,反復(fù) 3-4 次。

    測(cè)定步驟和操作表:

    1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 0min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 485nm。

    2、操作表

     

    對(duì)照管

    測(cè)定管

    樣品(g)

    0.05

    0.05

    試劑一(mL)

     

    0.1

    試劑二(mL)

    0.2

    0.1

    置于 EP 管中,充分混勻,37℃,暗培養(yǎng) 6h,取出后立即冰浴 5min

    試劑三(mL)

    0.1

    0.1

    反復(fù)震蕩數(shù)次,37℃保溫 10min,10000g,4℃,離心 5min,取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板,對(duì)照管調(diào)零,測(cè)定 A 485 。

    脫氫酶活力計(jì)算:

    酶活單位定義:

    37℃時(shí),每克樣品每小時(shí)使反應(yīng)體系 OD 值每增加 0.01 為一個(gè)酶活單位。計(jì)算公式:脫氫酶活性(U/g)=A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

    T:培養(yǎng)時(shí)間,h;W:樣品質(zhì)量,g

    注意事項(xiàng):

    1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃,最好在一周內(nèi)使用,若出現(xiàn)紅色,則不能使用。

    2. 試劑三易揮發(fā),有毒,為了您的健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,戴口zhao,戴乳膠手套操作。

    3. 反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng),并去除干凈殘留的反應(yīng)液。

    4. 如果測(cè)定出來(lái)的吸光值較大,減少樣品用量再進(jìn)行測(cè)定。

    5. 試劑盒 2-8℃保存。

     

    實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

    ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

    CCK8檢測(cè)

    HE染色

    蛋白相互作用分析

    Western Blot

    免疫組化IHC染色

    熒光定量PCR

    動(dòng)物模型服務(wù)

    流式細(xì)胞檢測(cè)

    免疫熒光染色

    激光共聚焦

    DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

    石蠟/冰凍切片

    透射電鏡服務(wù)

    掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

    蛋白雙向(2-D)

    動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

    免疫共沉淀

    原位雜交(FIsh

    蛋白質(zhì)純化

    分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

    組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

     

    蛋白雙向2D-WB

     

    藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

     

    番紅O固綠染色

    明膠酶譜MMP

    酶活性檢測(cè)

    動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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