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    苯乙醇胺A檢測試劑盒檢測(尿液組織飼料)
    更新時間:2022-09-14 點擊量:1098

    EF44A\J2

    苯乙醇胺A

    快速檢測試劑盒說明書

    一、原理

    本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯抗原,樣本中的殘留物苯乙醇胺A將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗苯乙醇胺A抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物苯乙醇胺A的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物苯乙醇胺A的含量。

    二、試劑盒特性

    試劑盒靈敏度:   0.1ppb

    孵育溫度:       25℃

    孵育時間:       30min15min

    樣本檢測下限

    尿             ·····························  0.1ppb

                 ·····························  0.2ppb

                 ·····························  0.5ppb

    交叉反應率

    苯乙醇胺A  ······································ 100%

    克倫特羅(Clenbuterol························ <1%

    沙丁胺醇(Salbutamol ·····················  <1%

    萊克多巴胺(Ractopamine···················  <1%

    樣本回收率

    尿         ······························  95%±25%

    組織、飼料   ······························  85%±25%

    三、試劑盒組成

    1

    微量測試孔

    每條8孔,一板12

    2

    標準液×6

    1ml/瓶)

    0ppb

    0.1ppb

    0.3ppb

    0.9ppb

    2.7ppb

    8.1ppb

    3

    酶標記物

    7ml

    紅色帽

    4

    抗體工作液

    10ml

    藍色帽

    5

    底物A

    7ml

    白色帽

    6

    底物B

    7ml

    黑色帽

    7

    終止液

    7ml

    黃色帽

    8

    20X濃縮洗滌液

    40ml

    白色帽

    9

    2X濃縮復溶液

    50ml

    透明帽

    四、所用儀器、試劑

    具備的儀器:酶標儀、打印機

    微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

    使用的試劑:乙酸乙酯、冰乙酸、正己烷

    五、樣本前處理步驟

    樣本處理前須知

    a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

    b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。

    樣本前處理需配置

    配液1   樣本提取液

    99ml乙酸乙酯,加入1ml冰乙酸,混合均勻

    配液2   樣本復溶液:

    2X濃縮復溶液用去離子水12稀釋。

    樣本處理:

    a尿樣本處理方法

    20µl清亮尿樣直接測定(如果尿樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min,直至得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍保存。

    樣本稀釋倍數:  1

    因樣本存在一定干擾,建議以1ppb為樣本陽性 的CUT OFF值。  

    b組織樣本處理方法

    1、 稱取均質后的組織樣本2±0.05g50ml離心管中

    2、 加入8ml樣本提取液,渦旋震蕩2min

    3、 室溫4000r/min離心10min

    4、 取上層清液2ml50-60℃吹干;

    5、 加入1ml正己烷,再加入1ml樣本復溶液,渦旋震蕩30秒;

    6、 室溫4000r/min離心10min;除去上層有機相;

    7、 取下層清液20µl用于分析。

    樣本稀釋倍數:  2

        因樣本存在一定干擾,建議以1ppb為樣本陽性的CUT OFF值。

     c飼料樣本處理方法

    1、 稱取均質后的飼料樣本1±0.05g50ml離心管中

    2、 加入10ml樣本提取液,渦旋震蕩3min

    3、 室溫4000r/min離心10min

    4、 取上層清液2ml50-60℃吹干;

    5、 加入1ml正己烷,再加入1ml樣本復溶液,渦旋震蕩30秒;

    6、 室溫4000r/min離心10min;除去上層有機相;

    7、 取下層清液20µl用于分析。

    樣本稀釋倍數:  5

    因樣本存在一定干擾,建議以2ppb為樣本陽性的CUT OFF值。本試劑盒檢測牛尿時回收率偏高。   

    六、 酶標免疫分析程序:

    測定前應須知:

    1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025℃)。

    2、 使用之后立即將所有試劑放回28℃

    3、 ELISA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。

    4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

    操作步驟:

    1、 28℃冷藏環境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

    2、 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照119稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

    3、 取出框架及需要數量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于28℃

    4、 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

    5、 標準品/樣本20µl/到各自的微孔中,然后加酶標記物50µl/,再加入80µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環境反應30min

    6、 將孔內液體甩干,用稀釋好的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

    7、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環境中避光顯色15min

    8、 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內讀數),測定每孔OD值。

    七、結果判定

    結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含苯乙醇胺A量成負相關。

    1、粗略判定:

    用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb2.1430.1ppb1.8660.3ppb1.6150.9ppb0.9642.7ppb0.4138.1ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是0.3ppb0.9ppb;樣本2的濃度范圍是2.7ppb8.1ppb,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中苯乙醇胺A實際濃度。

    2、定量分析

    1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

    百分吸光%)=

    B

    ×100%

    B0

    B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

    B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

    2)標準曲線的繪制與計算

    以標準品百分吸光率為縱坐標,以苯乙醇胺A標準品濃ng/ml)的半對數為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中苯乙醇胺A實際濃度。

    若利用試劑盒專業分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(歡迎來電索取)

    八、 注意事項

    1、 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫(2025℃)會導致所有標準的OD值偏低。

    2、 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

    3、 混合要均勻,否則會出現重復性不好的現象。

    4、 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

    5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

    6、 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質和無色的發色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

    7、 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質。

    8、 該試劑盒最佳反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

    九、儲藏條件和保質期

    1、 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。

    2、  期:該產品有效期為1年,生產日期見包裝盒。

    提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結果,請放心使用。

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