網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > 己烯雌酚快速檢測試劑盒操作步驟
    產(chǎn)品目錄
    己烯雌酚快速檢測試劑盒操作步驟
    更新時間:2022-12-21 點擊量:1329

    己烯雌酚快速檢測試劑盒說明書

     

    一、原理

     

    本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物己烯雌酚將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗己烯雌酚抗體,加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物己烯雌酚的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物己烯雌酚的含量。

     

    二、試劑盒特性

     

    u試劑盒靈敏度:  0.1ppb

     

    u 孵育溫度: 37℃

    u 孵育時間: 30min~30min~15min

    u 樣本檢測下限

     

    組織(蝦、魚) ······························· 0.2 ppb

    豬肉/肝 雞肉/肝 ······························· 2 ppb

    肌肉組織(方法二)  ··························· 0.1 ppb

    ············································ 20ppb

    尿 ··········································· 0.6ppb

    u  交叉反應(yīng)率

    己烯雌酚 ········································ 100%

    雙烯雌酚 ········································ 38.5%

    己烷雌酚 ········································ 8.5%

    己炔雌二醇 ··································· ﹤0.1%

    雌三醇 ········································· ﹤0.1%

     

    u樣本回收率

     

    ·········································· 90±10%

    ·········································· 85±10%

    尿 ·········································· 70±10%

    三、試劑盒組成  

       

    1  微量測試孔 每條 8 孔,一板 12 條

        

     

     

     標(biāo)準(zhǔn)液×6 瓶 0ppb 0.1ppb

    2  0.3ppb 0.9ppb

     1ml/瓶)  

      2.7ppb 8.1ppb

       

       

    3 酶標(biāo)記物 12ml 紅色帽

       

    4 抗體工作液 7ml 藍(lán)色帽

       

    5 底物 A 液 7ml 白色帽

       

    6 底物 B 液 7ml 黑色帽

       

    7 終止液 7ml 黃色帽

       

    8 20X 濃縮洗滌液 40ml 白色帽

       

    9 5X 濃縮復(fù)溶液 50ml 透明帽

       

     

    四、所用儀器、試劑

     

    具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮吹儀、恒溫箱

     

    微量移液器:單道 20~200µl、單道 100~1000µl、

     

    多道 30~300 µl

     

    劑:乙腈、氫氧化鈉、氯仿、丙酮、濃磷

     

    酸(含量 85%)、乙酸乙酯

     

    五、樣本前處理步驟

     

    u樣本處理前須知

     

    a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

     

    b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

    u 樣本前處理需配制:

     

    配液 1 6M H3PO4  溶液

     

    100ml 濃 H3PO4(含量 85%)加去離子

     

    150ml 混合均勻。

     

    配液 2 2M NaOH 溶液

     

    8gNaOH 加去離子水 100ml 溶解。

     

    配液 3 1M NaOH 溶液

     

    4gNaOH 加去離子水 100ml 溶解。

     

    配液 4 乙腈-丙酮混合液

     

     

    V 乙腈-V 丙酮 = 4 : 1

     

    配液 5 樣本復(fù)溶液:

     

    5X 濃縮復(fù)溶液用去離子水 1:4 稀釋。

     

    u樣本處理:

     

    a)組織(雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚)處理方法

     

    1、稱取 2±0.05g 勻漿后的樣本,加入 6ml 乙腈-丙

     

    酮混合液,震蕩 2min,15℃,4000r/min 以上,離心 10min。

     

    2、取 3ml 上清液,60℃氮氣/空氣吹干。

     

    3、加入 0.5ml 氯仿,渦動 20s,加入 2ml 2M NaOH,

     

    渦動 30s,4000r/min 以上,離心 5min。

     

    4、取 1ml 上清液,加入 200µl 6M H3PO4,渦動 5s。5、加入 3ml 乙腈萃取,振蕩 2min,室溫 4000r/min

     

    以上,離心 10min,取上層有機(jī)相, 60℃氮氣/空氣吹干。

     

    6、用 1ml 樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,混勻

     

    30s。

     

    不同樣本按如下方法稀釋:

     

    1、 蝦魚:直接取 50µl 水相用于檢測。

     

    2、 豬肉/肝、雞肉/肝:取 50µl 水相加入 450µl 樣

     

    本復(fù)溶液,渦動混合 30s;取 50µl 用于檢測。

     

    樣本的稀釋倍數(shù):蝦魚稀釋倍數(shù):2

     

    豬肉/肝、雞肉/肝稀釋倍數(shù):20

     

    b)肌肉組織處理方法二

     

    1、稱取 2±0.05g 勻漿后的樣本,加入 2ml 2M

     

    NaOH 溶液,震蕩 2min;2、加入 8ml 乙酸乙酯,劇烈震蕩 5min ;

     

    3、 15℃,4000r/min 以上,離心 10min;

     

    4、取 4ml 上層有機(jī)相, 60℃氮氣/空氣吹干;

     

    5、用 1ml 樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,混勻

     

    30s。

     

    樣本稀釋倍數(shù):1

     

    c)飼料處理方法

     

    1、稱取 2±0.05g 搗粹后的飼料樣本,加入 8ml 乙

     

    腈,振搖 2min,15℃ 4000r/min 以上離心 10min;2、取 2ml 上清液,60℃氮氣/空氣吹干;

     

    3、加入 0.5ml 氯仿,渦動 20s,加入 2ml 1M NaOH,

     

     

    渦動 30s,4000r/min 以上,離心 5min;4、取 1ml 上清液,加入 100µl 6M H3PO4,渦動 5s;

     

    不同樣本按如下方法稀釋:

     

    1、 配合料:取 50µl,加入 950µl 樣本復(fù)溶液,渦

     

    動混勻 30s,取 50µl 用于檢測。

     

    2、 濃縮料/預(yù)混料:取 25µl,加入 975µl 樣本復(fù)溶液,渦動混勻 30s,取 50µl 用于檢測。

    樣本稀釋倍數(shù):

     

    配合料稀釋倍數(shù):100

     

    濃縮料、預(yù)混料稀釋倍數(shù):200

     

    d) 尿樣樣本處理方法

     

    1、取 2ml 尿液到離心管中,室溫 4000r/min 以上,

     

    離心 10min,直至清亮;2、移取 1ml 清亮尿液至離心管中,加入 1ml 1M

     

    NaOH 強(qiáng)烈振蕩 5min;3、加入 100µl 6M H3PO4,渦動 30 s;

     

    4、再加入 8ml 氯仿進(jìn)行萃取,振蕩 5min。15℃,

     

    4000r/min 以上離心 10min;

     

    5、去掉上層的水相,取下層有機(jī)相 4 ml,60℃氮

     

    /空氣吹干;6、用 3ml 樣本復(fù)溶液干燥的殘留物,混合 30s 7、取 50µl 用于分析。

     

    樣本稀釋倍數(shù):6

     

    六、酶標(biāo)免疫分析程序:

     

    u測定前應(yīng)須知:

     

    1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫

     

    20~25℃)。

     

    2、 使用之后立即將所有試劑放回 2~8℃。

     

    3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點。

     

    4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

     

    u操作步驟:

     

    1、從 2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~

     

    25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

     

    2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放

     

     

    入自封袋,保存于 2-8℃。

     

    3、配液:將 40ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水按照 1:19 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

     

    4、編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

     

    5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中,然后加加入抗體工作液 50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。37℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。

     

    6、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4~5 次,每次間隔 15~30 秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

     

    7、每孔加入酶標(biāo)記物 100µl,蓋板膜蓋板后置37℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液充分洗,4~5 遍(同上),用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

     

    8、顯色:加入底物 A 液 50µl/孔,再加入底物 B

     

    50µl/孔,輕輕振蕩混勻,37℃環(huán)境中避光顯色 15min。

     

    9、測定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處(建議用雙波長 450/630n m 檢測,5min 內(nèi)讀數(shù)),測定每孔 OD 值。

     

    七、結(jié)果判定

     

    結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含己烯雌酚量成負(fù)相關(guān)。

     

    1、粗略判定:

     

    用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3,樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:

     

    0ppb 為 2.243; 0.1ppb 為 1.816;0.3ppb 為 1.415; 0.9ppb 為 0.74;2.7ppb 為 0.313;8.1ppb 為 0.155。

     

    則樣本 1 的濃度范圍是 2.7ppb~8.1ppb;樣本 2 的濃度范圍是 0.3ppb~0.9ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中己烯雌酚實際濃度。

     

    2、定量分析

    1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分 2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見

    吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙 包裝盒。

    孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘 提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正

    100%,即   常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

     B

    百分吸光率(%)=  ×100%

     B0

     

     

    B

    —標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

     

    2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以己烯雌酚標(biāo)

    準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù) 即為樣本中己烯雌酚實際濃度。

     

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索取)

     

    八、 注意事項

     

    1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~

     

    25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

     

    2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

     

    3、混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

     

    4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。

     

    5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

     

    6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

     

    7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時,表示試劑可能變質(zhì)。

     

    8、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為 37℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

     

    九、儲藏條件和保質(zhì)期

     

    1、儲藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,不要冷凍。

     

    2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

    如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

    實驗代做服務(wù):


    滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

    主站蜘蛛池模板: 男女xx00动态图120秒| 国产猛烈高潮尖叫视频免费| 夜夜偷天天爽夜夜爱| 国产精品一区二区三| 国产在线乱子伦一区二区| 午夜一区二区三区| 亚洲精品在线播放视频| 亚洲va国产va天堂va久久| 久久不见久久见免费影院www日本| 一本色道久久88亚洲精品综合| 84pao强力打造| 欧美人与物videos另| 精品欧美一区二区3d动漫| 欧美高清免费一级在线| 欧美xxxxx做受vr| 成人午夜视频免费看欧美| 国外性xxxnxxxf视频| 国产一区二区三区亚洲综合| 伦理片中文字幕完整视频| 九九热精品视频| freexx性欧美另类hd偷拍| 69堂在线观看| 男女男精品网站| 日韩精品一区二区三区视频 | 特级毛片在线大全免费播放| 日本福利片国产午夜久久| 女人18毛片a级18**多水真多| 国产在线视频99| 亚洲精品无码久久久久秋霞| 久久人午夜亚洲精品无码区| 2019国产精品青青草原| 精品久久中文字幕| 日本护士handjob| 国产精品成人免费综合| 免费a级毛片在线播放| 久久不见久久见免费影院www日本| 亚洲资源最新版在线观看| 熟女老女人的网站| 尹人香蕉久久99天天拍久女久| 国产免费观看网站| 亚洲不卡av不卡一区二区|