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    怎樣縮小ELISA實(shí)驗(yàn)中的誤差
    更新時(shí)間:2011-09-09 點(diǎn)擊量:1659

    怎樣縮小ELISA實(shí)驗(yàn)中的誤差

     

       在自然因素(試劑穩(wěn)定性、準(zhǔn)確率、儀器精密度)和人為因素(操作者)并存的情況下,要準(zhǔn)確報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果,尚為一個(gè)值得探討的話題。現(xiàn)從以下方面加以討論。

     1)檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。

     2)使用校對(duì)過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要。

      (3) 評(píng)估試劑的實(shí)用性。試劑的穩(wěn)定與否,對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用。

     4)操作前仔細(xì)閱讀說明書。嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn),比如洗板次數(shù)的掌握等。

       (5) 加樣要準(zhǔn)確、快速。化學(xué)理論表明,生成物的量與反應(yīng)物的量成正相關(guān)。加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。另外,顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外,尤其室溫過高時(shí),保存期會(huì)縮短甚至失效。

      6)洗滌*。洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性。另外,洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。

      7)嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間。反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng),酶失活;反應(yīng)時(shí)間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。

      8)嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間。顯色時(shí)間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽(yáng)性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽(yáng)性,這可能是本底顯色的結(jié)果。

      9)注意試劑保存期,過保存期的試劑不能使用。

     

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