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    人肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)酶免ELISA說明書
    更新時間:2011-11-30 點擊量:795

    人肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)酶免ELISA說明書

    本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定人血清,細胞上清及相關液體樣本中肝素結合性表皮生長因子HB-EGF)量。上海研謹生物高品質ELISA試劑盒供應商,品質,售后完善。歡迎垂詢: 提供免費代檢測服務。

    實驗原理

        本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本肝素結合性表皮生長因子HB-EGF)水平。用純化的肝素結合性表皮生長因子HB-EGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肝素結合性表皮生長因子HB-EGF)再與HRP標記的HB-EGF抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肝素結合性表皮生長因子HB-EGF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人肝素結合性表皮生長因子HB-EGF)濃度。

    試劑盒組成

    試劑盒組成

    48孔配置

    96孔配置

    保存

    說明書

    1

    1

    封板膜

    2片(48

    2片(96

    密封袋

    1

    1

    酶標包被板

    1×48

    1×96

    2-8℃保存

    標準品:720ng/L

    0.5ml×1

    0.5ml×1

    2-8℃保存

    標準品稀釋液

    1.5ml×1

    1.5ml×1

    2-8℃保存

    酶標試劑

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8℃保存

    樣品稀釋液

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8℃保存

    顯色劑A

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8℃保存

    顯色劑B

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8℃保存

    終止液

    3ml×1

    6ml×1

    2-8℃保存

    濃縮洗滌液

    20ml×20倍)×1

    20ml×30倍)×1

    2-8℃保存

    樣本處理及要求

    1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

    2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

    3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

    5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融.

    7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步驟

    1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為480ng/L320ng/L ,160ng/L80ng/L40ng/L)。

    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液50μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘

    4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外

    7. 溫育:操作同3

    8. 洗滌:操作同5

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 

    10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)

    11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    注意事項:

    1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6. 底物請避光保存。

    7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9. 本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

    計算

    以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,    

    在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD      

    值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      

    倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標      

    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

    代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

    倍數,即為樣品的實際濃度。                  

      

    試劑盒性能:

    1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。

    2.批內與批見應分別小于9%15%

             

    保存條件及有效期:

    1.試劑盒保存:2-8

    2.有效期:6個月

    海研謹生物科技有限公司專業銷售各種品牌價格檔次的ELISA試劑盒。服務于高校及免疫學科研單位。*,售后服務完善。并可以免費代檢測,更好的為您服務。

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