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    小鼠肝炎病毒(MHV)ELISA檢測試劑盒使用說明書
    更新時間:2024-09-06 點擊量:434

    本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

    小鼠(Mouse)肝炎病毒MHV

    ELISA檢測試劑盒

    使用說明書

    檢測原理

    試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被肝炎病毒抗原的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中肝炎病毒MHV)的存在與否。

    樣品收集、處理及保存方法

    1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

    2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

    3.  細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

    4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

    5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    自備物品

    1. 酶標(biāo)儀(450nm)

    2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

    3. 37℃恒溫箱

    操作注意事項

    1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

    2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

    3.  預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達到試劑盒的的最佳檢測效果。

    4.  嚴格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

    5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

    試劑盒組成

    名稱

    96孔配置

    48孔配置

    備注

    微孔酶標(biāo)板

    12孔×8條

    12孔×4條

    陰性對照

    0.5mL

    0.5mL

    陽性對照

    0.5mL

    0.5mL

    檢測抗體-HRP

    10mL

    5mL

    20×洗滌緩沖液

    25mL

    15mL

    按說明書進行稀釋

    樣本稀釋液

    6mL

    3mL

    底物A

    6mL

    3mL

    底物B

    6mL

    3mL

    終止液

    6mL

    3mL

    封板膜

    2張

    2張

    說明書

    1份

    1份

    自封袋

    1個

    1個

     

    試劑的準(zhǔn)備

     20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

    洗板方法

    1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

    2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

    操作步驟

    1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2.  設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;

    3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

    4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

    6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

    結(jié)果判斷

     1.  試驗有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;

                    陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

    2.  臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

    3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

    4.  陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性

    試劑盒性能

    1.  準(zhǔn)確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗結(jié)果有效。

    2.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

    3.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

    4.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

    5.  有效期:6個月

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