網站首頁技術中心 > 大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA
    產品目錄
    大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA
    更新時間:2013-08-06 點擊量:909

    大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA

    試劑盒說明書

    本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)的含量。

    實驗原理:

        本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)水平。用純化的大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)再與HRP標記的羊抗鼠抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)濃度。

    試劑盒組成:

    試劑盒組成

    48孔配置

    96孔配置

    保存

    說明書

    1份

    1份

     

    封板膜

    2片(48)

    2片(96)

     

    密封袋

    1個

    1個

     

    酶標包被板

    1×48

    1×96

    2-8℃保存

    標準品:72ng/L

    0.5ml×1瓶

    0.5ml×1瓶

    2-8℃保存

    標準品稀釋液

    1.5ml×1瓶

    1.5ml×1瓶

    2-8℃保存

    酶標試劑

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    樣品稀釋液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    顯色劑A液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    顯色劑B液

    3 ml×1瓶

    6 ml×1瓶

    2-8℃保存

    終止液

    3ml×1瓶

    6ml×1瓶

    2-8℃保存

    濃縮洗滌液

    (20ml×20倍)×1瓶

    (20ml×30倍)×1瓶

    2-8℃保存

     

    樣本處理及要求:

    1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

    2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

    3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

    5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

    7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步驟

    1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為48ng/L,32ng/L ,16ng/L,8ng/L, 4ng/L)。

    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

    7. 溫育:操作同3。

    8. 洗滌:操作同5。

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    注意事項:

    1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6. 底物請避光保存。

    7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9. 本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

    計算:

    以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

    在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD     

    值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋     

    倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標     

    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值     

    代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋     

    倍數,即為樣品的實際濃度。                 

    試劑盒性能:

    1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。

    2.批內與批見應分別小于9%和15%

    保存條件及有效期:

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6個月

     

    應廣大客戶的需求,(在本公司購買的ELISA試劑盒可以享受免費代測服務)。原則上1—2周可以出代測結果,有特殊情況的可以提前的客服!*期間購買ELISA試劑盒都會有一份精美禮品,請及時向客服或者銷售人員索取!

     

    滬公網安備 31011802001677號

    主站蜘蛛池模板: 日韩在线不卡免费视频一区| 亚洲精品亚洲人成在线观看麻豆| 884hutv四虎永久黄网| 性高湖久久久久久久久| 久久国产成人精品| 校霸把学霸往死里做| 亚洲成人福利网站| 污污网站免费在线观看| 免费国产成人手机在线观看 | 亚洲欧美日韩国产一区图片| 国自产精品手机在线观看视频| 《波多野结衣系列mkmp-305》| 成在线人视频免费视频| 久久久久久久99视频| 日韩欧美亚洲天堂| 亚洲jizzjizz妇女| 欧美成人三级一区二区在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人精品 | 亚洲春色第一页| 燃情仕途小说全文阅读免费无弹窗下载| 农夫山泉有点甜高清2在线观看| 色www永久免费视频| 国产乱女乱子视频在线播放| 龙珠全彩里番acg同人本子| 国产精品成人va在线播放| 91探花视频在线观看| 国内精品卡1卡2卡区别| 99热这里只有精品免费播放| 天天av天天翘天天综合网| jizz黄色片| 女人十八黄毛片| xxxxx性欧美| 宅男噜噜噜66在线观看网站| 一级艳片加勒比女海盗1| 成人毛片100免费观看| 中文字幕乳授乳奶水电影小说| 日日大香人伊一本线久| 久久久久久久97| 无码国模国产在线观看| 久久99亚洲网美利坚合众国| 日本三级香港三级人妇99|