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    植物抗壞血酸過氧化物酶(APX)ELISA試劑盒

    植物抗壞血酸過氧化物酶(APX)ELISA試劑盒

    產(chǎn)品型號:

    所屬分類:其它ELISA

    產(chǎn)品時間:2024-08-19

    簡要描述:本試劑僅供研究使用。抗壞血酸過氧化物酶試劑盒用于測定植物組織,細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中抗壞血酸過氧化物酶(APX)的活性。*中,詳細(xì)請!

    詳細(xì)說明:

    植物抗壞血酸過氧化物酶(APX)ELISA試劑盒

    本試劑僅供研究使用抗壞血酸過氧化物酶試劑盒用于測定植物組織,細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性。

    ELISA原理:

       本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物抗壞血酸過氧化物酶(APX)水平。用純化的植物抗壞血酸過氧化物酶(APX)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物抗壞血酸過氧化物酶(APX),再與HRP標(biāo)記的抗壞血酸過氧化物酶(APX)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗壞血酸過氧化物酶(APX)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中植物抗壞血酸過氧化物酶(APX)濃度。

     

    試劑盒組成

    試劑盒組成

    48孔配置

    96孔配置

    保存

    說明書

    1

    1

     

    封板膜

    2片(48

    2片(96

     

    密封袋

    1

    1

     

    酶標(biāo)包被板

    1×48

    1×96

    2-8℃保存

    標(biāo)準(zhǔn)品:225IU/ml

    0.5ml×1

    0.5ml×1

    2-8℃保存

    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    1.5ml×1

    1.5ml×1

    2-8℃保存

    酶標(biāo)試劑

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8℃保存

    樣品稀釋液

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8℃保存

    顯色劑A

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8℃保存

    顯色劑B

    3 ml×1

    6 ml×1

    2-8℃保存

    終止液

    3ml×1

    6ml×1

    2-8℃保存

    濃縮洗滌液

    20ml×20倍)×1

    20ml×30倍)×1

    2-8℃保存

     

    標(biāo)本要求:

    1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

     

    操作步驟:

    1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為150 IU/ml100 IU/ml50 IU/ml25 IU/ml 12.5IU/ml)。

    2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。

    5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

    6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

    7.         溫育:操作同3

    8.         洗滌:操作同5

    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

    11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

     

    注意事項:

    1.  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    2.  濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

    3.  各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

    4.  請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

    5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.  底物請避光保存。

    7.  嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

    8.  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    9.  本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

     

     

     

     

     

    計算:

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),   

    在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD     

    值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋     

    倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)     

    準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD     

    代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋     

    倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

    試劑盒性能:

    1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

    2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%15%

    保存條件及有效期:

    1.試劑盒保存:2-8

    2.有效期:6個月

     

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